我院于2018年于剑桥国际干细胞学术研讨会发表关于我院自製的不含动物血清的培养基(HELENE Medium)的实绩。此次发表的重点有二，第一点是在相同时间内，相较于其他市售培养基，使用HELENE Medium可以培养出更多的细胞数量；第二点是使用HELENE Medium培养出的细胞尺寸最小。学界的论证认为越小的干细胞分化为纤维芽细胞的可能性越低
综合上述两点可以证实，从耳后採取的脂肪组织中，确实是含有间充质干细胞在内的。相较于大腿或是肚子採集到的脂肪量比较低，但透过我院自有实验室的技术及HELENE Medium，可以在一个月内培养至最多22.5亿个间充质干细胞的数量。
为了确保我们提供给患者的干细胞的质量，我们将干细胞样本提交给外部第三方专业机构进行检测。 该测试符合再生医学的良好生产规范（GMP）和良好实验室规范（GLP），还包括三个独立设计的实验。 我们在自己的实验室也进行了同样的测试，并与外部第三方专业机构公平地验证了提供给患者的干细胞的质量。
来自三个样本捐赠者的脂肪组织在我们的实验室进行了培养，并送去进行测试。 样品从耳后取下，使用特殊技术和专用酶对组织进行分离和分解。 经过一个月的培养期后，达到规定数量的细胞用MACS进行分离，用细胞计数器验证细胞数，然后提供给第三方试剂公司Takara Bio Inc.
| 检测项目 | 试验名称 | 使用检体 | 检测结果 |
|---|---|---|---|
| 是否有感染源或 污染源 |
无菌试验 （日本薬局方 直接法 选项：方法适用性试验） |
QC_AL Lot:#13349 | 阴性 |
| 无菌试验 （日本薬局方 直接法） |
QC_AL Lot:#13349 | 阴性 | |
| 支原体(霉浆菌)排除试验 （日本薬局方 参考信息 PCR法（包含7种菌种抑制确认）） |
QC_AL Lot:#13349 | 阴性 | |
| 毒素试验 （日本薬局方 动力学浊度法 选项：干扰因素试验） |
QC_AL Lot:#13349 | 阴性 | |
| 毒素试验 （日本薬局方 动力学浊度法） |
QC_AL Lot:#13349 | 检出精度以下 | |
| 成瘤性 | 集落形成试验 | QC_AL Lot:#13349 | 阴性 |
| 确认是否为干细胞 | FCM试验 (CD45- CD105+) |
QC_AL Lot:#13349 | CD45- 92.1％ CD105+ 100% |
下方的图是脂肪组织的图像豆子一样圆形物体是脂肪组织。干细胞在被称呼为干细胞生态位像纤维状网状部里存在着。也就是说，干细胞并不是存在于脂肪滴之中，而是周边纤维状的部位中存在着。接着我们整理了耳后脂肪与腹部脂肪的不同。
| 耳后脂肪 | 腹部皮下脂肪 | |
| 外观照片 |  |
 |
| 图 |  |
 |
| 疼痛感 | 少 | 強烈 （像派青一祥的疼痛） |
| 内出血 | 稀少 | 可能性高 |
| 圧迫 | 只需创可贴压迫 （回复时间：短） |
棉片圧迫 （回复时间：长） |
脂肪来源细胞并不存在于黄色脂滴中，而是隐藏在被称为间质的脂滴周围（即干细胞小环境）中。无论是腹部脂肪还是耳后脂肪，干细胞都存在，但是在″脂滴较少、间质较多的脂肪″中，干细胞的比例更高。
在HELENE诊所中，主要采集对患者疼痛感较小的耳后脂肪。 但是对于希望采集腹部脂肪的患者来说，也可以通过腹部脂肪抽吸手术来获取。
在HELENE细胞中心培养完成的干细胞，在提供客户回输之前，使用至少两道工序来计测，检查干细胞的数量与存活状况。并且将计测结果印出后进行实验室核章，秉持科学精神与负责任的态度提供给所有客户。
取得细胞样本后，加入常用于区分活细胞与死细胞的生物染色剂-0.4%台盼蓝溶液进行染色。其染色法为染料排斥试验(dye exclusion)，利用染剂能够渗入死细胞，但会被活细胞的细胞膜阻隔的特性，加以区分以利进行存活率的计算。染色后的样品以往会透过显微镜观察并人工算出数量，我院使用自动细胞计数器(Thermo Fisher Countess II FL)自动辨识萤光反应并完成分析。人工计算数量时，使用者不仅必须手动调整焦点，还必须在样品之间调整明视野光强度。而Countess II FL自动细胞计数器能够自动调整照明和焦点，以获得用于最佳图像质量。
在使用Countess II FL 测得数量之后，细胞中心会将细胞样本置于玻片上，以ZEISS Axio Vert.A1显微镜取得细胞图像。使用HELENE独自开发的AI程式读取图像，结合显微镜的焦距、细胞类型(间充质干细胞)、细胞培养箱的截面积等条件，透过共焦点水平观测细胞骨架，同时计算出细胞数量及细胞存活率。两道工法下来的精准度无限接近100%，做到其他地方无法比拟的匠人工序，从而确保HELENE品牌的治疗级干细胞，精确拿捏客户需求，并持续优化。
HELENE诊所于每次的治疗时，制作干细胞证明书呈现给客户以示对品质负责，做到透明化。
根据2021年的论文 [The safety of MSC therapy over the past 15 years: a meta-analysis]，该篇论文挑选了62篇研究报告进行分析，其中亦摘录了发表于国际知名期刊刺胳针的临床试验。其中多项试验干细胞的投予量超过5亿个细胞，且有达到10亿以上的投予量，不仅破除坊间的迷思，也证实了HELENE诊所的技术实力与世界级的研究机构接轨。
| Author | Year | Location | Dose | |
|---|---|---|---|---|
| Hess | 2017 | USA | 1200×106 cells | 12亿个干细胞 |
| Bartunek | 2013 | Belgium | 600 -1200×106 cells | 6-12亿个干细胞 |
| Chanbers | 2017 | Australia | 1×109 cells | 10亿个干细胞 / 肺部疾病 |
| Steinberg | 2017 | USA | 1×109 cells | 10亿个干细胞 / 中风 |
| Igresias | 2021 | Mexico | 1×109 cells | 10亿个干细胞 / 肺部疾病 |
| Matsuoka | 2024 | Japan | 1-2×109 cells | 20亿个干细胞 / 抗衰老 |
在许多临床数据中无法找到对某些特定疾病投予低细胞数量的案例，这表明在某些情况下较低剂量的MSC甚至可能是无效的。在不久的将来待科学数据与研究有更新进展时，MSC治疗方案、治疗目标、来源与培养方案还有剂量差异需要持续改进达到标准化，以便更好地比较相关临床试验的结果。在此之前，HELENE诊所将会持续改进治疗方法，针对不同患者的年龄、身体状况与疾病调配不同的细胞与外泌体数量回输方案，确保在完全安全的情况下提供最佳的干细胞治疗。
[引用] The safety of MSC therapy over the past 15 years: a meta-analysis.
https://doi.org/10.1186/s13287-021-02609-x
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