2018年，在剑桥国际干细胞研讨会上，我们展示了我们自制的无血清培养基（HELENE Medium）的结果。 首先，HELENE Medium 比其他市售培养基可以在相同的时间内培养更多的细胞，其次，HELENE Medium 培养的间充质干细胞体积最小。 有科学证据表明，较小的干细胞不太可能分化成成纤维细胞。
结合以上两点，证实从耳后采集的脂肪组织中含有MSCs。 与大腿和腹部相比，采集的脂肪量较少，但凭借我们独特的实验室技术和 HELENE Medium，一个月可培养多达 22.5 亿个 MSC。
为了保证我们提供给患者的干细胞质量，我们将与此质量证书相同过程中生产的干细胞样本的检测外包。 该测试符合GMP（良好生产规范）和再生医学GLP（良好实验室规范），包括三个独特设计的实验。 我们在自己的实验室进行了等效测试后提供细胞，这里也描述了向第三方测试公司公平提供给患者的干细胞质量验证结果。
来自三个样品供体的脂肪组织在我们的实验室进行培养并送去检查。 样本取自耳后，使用特殊技术和专用酶分离和分解组织。 单个细胞培养一个月，达到指定数量的细胞通过MACS分离，用细胞计数仪确认细胞数量后，提供给第三方检测公司Takara Bio Inc.。
| 测试目的 | 考试名称 | 规格样本 | 结果 |
|---|---|---|---|
| 感染、污染 | 无菌测试 （日本药典直接法选项：方法兼容性测试） |
QC_AL 批号：#13349 | 消极的 |
| 无菌测试 （日本药典直接法） |
QC_AL 批号：#13349 | 消极的 | |
| 支原体检测阴性 （日本药典参考资料PCR法（确认7种细菌的异化）） |
QC_AL 批号：#13349 | 消极的 | |
| 内毒素检查 （日本药典动力学比浊法选项：反应性滴落因子测试） |
QC_AL 批号：#13349 | 消极的 | |
| 内毒素检查 （日本药典动力学-比浊法） |
QC_AL 批号：#13349 | 小于检测精度 | |
| 瘤化 | 集落形成试验 | QC_AL 批号：#13349 | 消极的 |
| 干细胞确认 | FCM考试 (CD45-CD105+) |
QC_AL 批号：#13349 | CD45- 92.1% CD105+ 100% |
以上是脂肪组织的形象图，像豆子一样的圆形物体就是脂肪组织。 干细胞隐藏在称为干细胞生态位的纤维网状区域中。 换句话说，干细胞不存在于脂滴中，而是存在于周围的纤维状位置。
让我们来看看耳朵脂肪和腹部脂肪之间的区别。
| 耳脂 | 腹部皮下脂肪 | |
| 外观照片 |  |
 |
| 数字 |  |
 |
| 疼痛 | 很少 | 强的 （像瘀伤一样疼痛） |
| 内部出血 | 很稀少 | 许多 |
| 压迫 | 仅创可贴压力 | 纱布加压 |
脂肪来源的细胞并不位于黄色脂滴中，而是潜伏在称为基质的脂滴（= 干细胞生态位）周围。
腹部脂肪和耳背脂肪都存在干细胞，但干细胞在“脂滴少、间质多的脂肪”中的比例更高。
在Helene，我们主要收集耳后脂肪，这对患者来说痛苦较小。
但是，对于那些喜欢腹部脂肪的人，也可以使用腹部吸脂术。
在 HELENE 细胞中心培养的干细胞至少分两个阶段进行测量，以在给药和交付给客户之前确认干细胞数量和活力。 结果经实验室批准并打印。 我们以科学和负责任的方式为所有客户服务。
获得细胞样本后，加入 0.4% 太攀蓝溶液进行染色，这是一种常用于区分活细胞和死细胞的重要染色剂。 染色法为染料排阻试验，利用染色液透过死细胞而被活细胞的细胞膜阻隔来区分细胞，进行存活率计算。 传统上，染色样品是在显微镜下观察并手动计数，但自动化单元自动识别荧光反应并完成分析。 对于手动计数，不仅必须手动对焦，还必须调整样品之间的明场光量。 Countess II FL 自动细胞计数仪可以在使用时自动调整照明和焦点以获得最佳图像质量。
在使用 Countess II FL 进行定量后，我们的细胞中心将细胞样本安装在载玻片上，并使用蔡司 Axio Vert.A1 显微镜获取细胞图像。 HELENE专有的图像读取AI程序用于在共聚焦水平观察细胞骨架，结合显微镜的焦距和细胞类型（MSC）和细胞培养瓶的横截面积来确定细胞数量，细胞计算存活率。 通过这两个步骤，计算准确率接近100%，无与伦比的手工工艺，HELENE品牌治疗级干细胞根据您的需求精确定制并不断优化。我们保证
在 HELENE Clinic，我们通过为每次治疗提供干细胞证书来证明我们对质量和透明度的承诺。
根据2021年论文【过去15年MSC治疗的安全性：一项荟萃分析】，对国际知名期刊《柳叶刀》发表的包括临床试验摘录在内的62项研究进行了分析。被选为 超过 5 亿，在某些情况下多达 10 亿，MSCs 已在这些临床试验中进行管理，消除了神话并证实了 HELENE 诊所与世界一流研究机构的技术实力。
| 作者 | 年 | 地点 | 剂量 | |
|---|---|---|---|---|
| 赫斯 | 2017 | 美国 | 1200×106 细胞 | 12亿个干细胞 |
| 巴尔图内克 | 2013 | 比利时 | 600 -1200×106 细胞 | 6-12亿个干细胞 |
| 钱伯斯 | 2017 | 澳大利亚 | 1×109 细胞 | 10亿干细胞/肺部疾病 |
| 斯坦伯格 | 2017 | 美国 | 1×109 细胞 | 10亿干细胞/中风 |
| 伊格雷西亚斯 | 2021 | 墨西哥 | 1×109 细胞 | 10亿干细胞/肺部疾病 |
| 松冈 | 2024 | 日本 | 1-2×109 细胞 | 20亿干细胞/抗衰老 |
大量临床数据表明，低剂量的 MSCs 在某些情况下甚至可能无效，因为我们无法找到针对特定疾病的低剂量细胞病例。 在不久的将来，随着科学数据和研究的更新，我们将不断完善MSC的治疗方案、治疗目标、来源、培养方案、剂量差异等，以更好地比较相关临床试验的结果，并加以规范。 在此之前，HELENE Clinic根据患者的年龄、身体状况和疾病，制定了不同数量的细胞和外泌体的再输注方案，为保证在完全安全的情况下获得最佳的干细胞治疗，治疗方法继续改善。
[引用] 过去 15 年 MSC 治疗的安全性：荟萃分析。
https://doi.org/10.1186/s13287-021-02609-x
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